pvdf膜使用前为什么要用甲醇浸泡(10)

发布时间： 2018-01-31

2、实验方法 

（1）PDVF 膜及滤纸的预处理：剪裁与胶大小一致的 PVDF膜，将其浸入甲醇液中浸泡10 s（快速激活PDVF 膜），去离子水处理5min，1×转移缓冲液处理10min 以上。 

（2）剪裁与胶同样大小的6层滤纸，用转移液缓冲液浸 泡后待用。

（3）取下电泳板，将其平置（使凹面玻璃板在下）， 小心取出夹板中的垫片及去掉上层玻璃板，切除多余凝胶，将含样品胶在蒸馏水及1转膜液中各漂洗一次。

（4）转膜： ①将样品胶与膜装入标有正、负极的转膜夹板中：由正 极侧开始，依次为海绵垫片→3层滤纸→PVDF膜→样品胶 →三层滤纸（排除气泡）→海棉垫片，扣紧转膜夹板， 放入含有转膜缓冲液的转移电泳槽中。 ②正确连接转移电泳连线，使电荷由负极向正极流动。 接通电源，恒压状态下，80V 转膜2 h（此操作在4℃冰 箱中进行） ③小心取出转移膜（用铅笔轻轻描出蛋白Marker带）， 在1×TBST液中漂洗两次。 ④将凝胶浸入考马斯亮蓝染色液中，检查蛋白转移是否 完全。

注意事项：

（1）开始转移时一定要检查电流大小。过高电流产生的热量 会导致转移失败，通常高电流是由于转移液配制不当造成的。

（2）低离子强度转移缓冲液可使用较高电压，而不会导致高 电流和过热，但转移过程中由凝胶中渗出的电解质可导致转移 缓冲液电导增加，缓冲能力降低。