pvdf膜使用前为什么要用甲醇浸泡(9)

发布时间： 2018-01-31

（8）凝胶玻璃板要定期做硅化处理：用氯仿或庚烷配 成5%二氯二甲硅烷溶液，用其浸泡或擦拭玻璃板，有机溶剂挥发时，二氯二甲硅烷即沉积在玻璃制品上。使用前用水反复冲洗多次或于180℃烘烤2h。

五、转膜

　　凝胶电泳结束后，将凝胶上分离到的蛋白条带通过转移电 泳方式转印至固相支持物上，然后分别用非标记一抗及二级 免疫试剂对其进行孵育、检测。

　　用于印迹法的固相支持物有多种，硝酸纤维素膜、尼龙膜 及PVDF膜较为常用。下面是介绍PVDF（聚偏氟乙烯）膜作为 固相支持物。 转膜的方式有湿转和半干转，下面介绍的湿转方法。

　　1、实验材料

　　（1）器材： 转移电泳仪，转仪电泳槽，PVDF膜，剪刀，滤 纸等。

　　（2）试剂：

　　①转移缓冲液：Tris 3.03 g，甘氨酸 14.4 g，甲醇 200 ml， 补ddH2O至 1000ml，每次配完可用2～3次。最好现配现用。 4℃ 避光保存。 ②考马斯亮蓝染色液（100ml）：考马斯亮蓝 R-250 0.25 g， 甲醇 50ml ，乙酸 10ml，蒸留水 40ml。待考马斯亮蓝R-250 溶解，用Whatman 1号滤纸过滤，以去除颗粒状物质。 ③脱色液：乙酸 10% (V/V)，甲醇 50% (V/V)，H2O 40% 。