pvdf膜使用前为什么要用甲醇浸泡(5)

发布时间： 2018-01-31

（4）计算样品总蛋白含量(ug/ul)：根据标准曲线图，找出样品蛋白在图中的位置，并计算出蛋白含量。

　　4.4 注意事项 

（1）制作的BSA标准曲线如不规律，应重新再做。 

（2）如果待测样品浓度高（如组织提取物），可用生理盐水 稀释倍后测定；如样品浓度底，可适当增加样品体积及减少水 的体积。 

（3）比色皿的清洁：由于测定液中含有考马斯亮蓝，使用过 的比色皿呈蓝色并蓝色不易被清水冲洗掉，需用无水乙醇先将 比色皿脱色皿脱色数分钟，而后分别用自来水、蒸馏水冲洗干净。

　　四、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉

　　1、原理 

各种蛋白质因所带的净电荷、分子量大小和形状不同面有不同 的迁移率。如果在电泳体系加入SDS，形成带负电荷长椭圆棒状 的蛋白质-SDS复合物。从而消除蛋白质原有的电荷和形体差异， 从而对蛋白质进行分离。 当对蛋白质样品做SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉分析时，要在样 品中加入含有SDS和B-巯基乙醇的样品处理液。

　　样品处理液中加入溴酚蓝染料，用于控制电泳的过程。

　　另外在样品液中加入适量的蔗糖或甘油以增大溶液密度，使加样时，使样品溶液可以沉入样品凹槽底部。

　　SDS-聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围取决于用于灌胶的聚丙烯酰 胺的浓度和交联度。SDS-聚丙烯酰胺凝胶大多按双丙烯酰胺：丙烯酰胺为了1：29配制，实验表明它能分离大小相差只有3%的多肽。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉成功的关键之一是电泳过程中蛋白质 与SDS的结合程度。影响它们结合的因素主要有三个：