pvdf膜使用前为什么要用甲醇浸泡(8)

发布时间： 2018-01-31

（2）吸取细胞总蛋白样品15 ul 加入0.5 ul EP管中，每样品管中分 别加入5ul 4×蛋白质凝胶电泳上样缓冲液，轻轻混合，98℃变性 8min（同时变性标准分子量Marker），立即插入冰中，涡旋数秒， 短暂离心。 

（3）吸出变性蛋白液，贴紧加样孔上方，将样品轻轻加入凝胶孔 中。 

（4）将电泳仪设置成稳压状态，接通电源，将电压调至100V使样 品通过浓缩胶（电压约8V/cm）。当染料进入分离胶后，将电压调 高到130V（约15V/cm）,继续电泳使染料至分离胶适当位置（4℃ 冰箱中进行电泳），结束电泳。

　　注意事项：

（1）设立必要的蛋白质分子量标志物。

（2）丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于 皮肤，其作用具有累积性，故称量时应带手套及口罩。 

（3）不同厂家的SDS可引起多肽的迁移图谱变化较大，建议认 准使用某一试剂级别。 

（4）一旦加入TEMED，应立即混旋并快速灌注入玻璃夹板。 

（5）过硫酸铵会缓慢分解，应隔周新鲜配制。 

（6）为保持电泳的平衡，在无样品孔中也应加入适量的4×蛋 白质电泳液。

（7）正确连接电泳连线正、负极方向（负极在上，正 极在下），经保证电荷由负极向正极流动。