甘氨酸洗脱抗体原理(3)

发布时间： 2019-04-20

3. 亲和层析

将抗体用TBS缓冲溶液以1：5的比例进行稀释，再用过滤器进行过滤。以每分钟0.5
ml的速度将抗血清上到柱上，为保证抗血清与填料的结合，需连续上柱2次并保留上样流出液。用TBS缓冲溶液清洗柱子至Aλ280nm<0.008后加pH2.7洗脱缓冲溶液，以0.5ml/min的速度洗脱至所有蛋白均流下来。用已经加入100ul中和缓冲溶液的1.5
ml EP管分管收集洗脱液，混匀后用pH试纸检查洗脱液的pH，如果pH低于7可利用中和缓冲液调至约pH7.4以防止抗体的变性。

在柱中加入10ml，pH1.9洗脱缓冲溶液，按上述方法收集洗脱液至Aλ280nm<0.008。

利用分光光度计测定各管中蛋白质的含量。若蛋白浓度低于0.5mg/ml可加入10%的甘油以便保存，将纯化的抗体分装后在2oC~8oC保存。

用含0.05%叠氮化钠的TBS缓冲溶液清洗柱子后将柱子储存在2oC~8oC环境。

4. 实验结果

利用SDS/PAGE检查洗脱获得的蛋白纯度并利用免疫电泳技术检查纯化后抗体的滴度。

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